Fiziološka otopina s fosfatom (PBS) je puferska otopina To se obično koristi za imunohistokemijsko (IHC) bojenje i često se koristi u biološkim istraživanjima. PBS je otopina soli na bazi vode koja sadrži natrijev hidrogen fosfat, natrijev klorid i, u nekim slučajevima, kalijev klorid i kalijev dihidrogen fosfat.
Imunohistokemijsko bojenje
Imunohistokemija se odnosi na postupak otkrivanja antigena poput proteina u stanicama a presjek tkiva primjenom načela vezanja antitijela posebno na biogene tkiva. Imunofluorescentno bojenje bila je prva metoda imunohistokemijskog bojenja.
Antigeni postaju vidljivi kada se konjugiraju s antitijelima pomoću fluorescentnih boja zbog an reakcija vezanja antigen-antitijelo. Taj se proces događa kada je aktiviran uzbudljivom svjetlošću određene valne duljine pod fluorescentnim mikroskopom.
Osmolarnost i koncentracija iona u otopinama odgovaraju koncentracijama u ljudskom tijelu - izotonične su.
Recept za PBS pufer
PBS možete pripremiti na nekoliko načina. Postoji više formula. Neki od njih ne sadrže kalij, dok drugi sadrže kalcij ili magnezij.
Ovaj je recept relativno jednostavan. Radi se o 10X PBS osnovnoj otopini (0,1M). Međutim, možete napraviti i rješenje 1X dionica ili započeti s ovim receptom 10X i razrijediti ga na 1X. Cijeli proces traje oko 10 minuta, a također je data i mogućnost dodavanja Tween-a.
Što će vam trebati za izradu PBS zaštitnog sloja
- Natrijev fosfat monobazni (bezvodni)
- Natrijum-fosfat dvoosni (bezvodni)
- Natrijev klorid
- Čamci za vaganje i vaganje
- Magnetska miješalica i miješalica
- PH sonda koja je kalibrirana i odgovarajuća rješenja za podešavanje pH
- Volumetrijska tikvica od 1 L
- Između 20 (neobavezno)
Kako napraviti PBS međuspremnik
- Teži 10,9 g bezvodnog natrijevog fosfata (Na2HPO4), 3,2 g bezvodnog natrijevog fosfata monobazni (NaH2PO4) i 90 g natrijevog klorida (NaCl). Otopiti u malo ispod 1L destilirane vode.
- Podesite pH na 7,4 i otopinu dovedite do konačnog volumena od 1L.
- Prije upotrebe razrijedite 10 puta i po potrebi prilagodite pH.
- Možete napraviti PBS otopinu koja sadrži 0,5 posto Tween 20 dodavanjem 5mL Tween 20 u 1L otopinu.
Savjeti za izradu PBS zaštitnog sloja
Spremite tampon na sobnu temperaturu nakon što ste napravili PBS otopinu.
Bezvodni reagensi mogu biti supstituirani, ali morat ćete ponovno izračunati odgovarajuću masu svakog od njih da biste smjestili dodane molekule vode.
Korištenje PBS pufera
Fiziološka otopina puirana fosfatima ima mnogo koristi jer je izotonična i netoksična za većinu stanica. Može se koristiti za razrjeđivanje tvari, a često se koristi za ispiranje spremnika stanica. PBS se može koristiti kao razrjeđivač u raznim metodama za sušenje biomolekula jer će molekule vode unutar njega biti strukturirane oko tvari, na primjer, proteina. Bit će "osušen" i imobiliziran na čvrstu površinu.
PH ostaje stabilan i konzistentan kako bi se spriječilo uništavanje stanica.
Tanki film vode koji se veže na tvar sprečava denaturaciju ili druge konformacijske promjene. Karbonatni puferi mogu se koristiti u iste svrhe, ali s manjom učinkovitošću.
PBS se također može koristiti za uzimanje referentnog spektra za mjerenje protein adsorpcija u elipsometriji.