RFLP i aplikacije za DNK analizu

Polimorfizam dužine frakcije restrikcije (RFLP) molekularna je metoda genetske analize koja omogućuje identifikaciju pojedinaca na temelju jedinstvenih obrazaca restrikcijski enzim rezanje u specifičnim regijama DNA.

Naziva se i RFLP analizom, a tehnika koristi prednost polimorfizmi u genetskim kodovima pojedinih ljudi. Iako svi pripadnici neke vrste imaju u osnovi istu genetsku strukturu, ove male razlike objašnjavaju razlike u fenotipu, poput izgleda ili metabolizma, među pojedincima.

Tehnika RFLP analize uključuje rezanje određenog područja DNA s poznatom varijabilnošću, s restrikcijskim enzimima, zatim razdvajanjem fragmenata DNA agaroznom gel elektroforezom i određivanjem broja fragmenata i relativne veličine.

Restriktivni enzim je enzim, molekula proteina, koji siječe DNK na mjestima restrikcije. U biti, DNK uzorak se razgrađuje i probavlja restriktivnim enzimima. Rezultirajući fragmenti odvojeni su prema njihovoj duljini, a uzorak veličina fragmenata razlikovat će se za svakog testiranog pojedinca.

Potpuni postupak RFLP zahtijeva obilježavanje sonde, fragmentaciju DNK, elektroforezu, blotting, hibridizaciju, pranje i autoradiografiju. Otkriveni RFLP vizualizira se pomoću rendgenskog filma u autoradiografiji, gdje se fragmenti DNA mogu pregledati i analizirati nakon što se elektroforezom odvoje jedan od drugog.

Neke aplikacije za RFLP analizu uključuju:

• DNK otisci prstiju: Forenzički znanstvenici mogu koristiti RFLP analizu za prepoznavanje osumnjičenih na temelju uzoraka dokaza prikupljenih na mjestima zločina.
• Očinstvo: RFLP se također koristi u određivanju očinstva ili u pronalaženju predaka.
• Genetska raznolikost: Tehnika se može koristiti u proučavanju evolucije i migracija divljih životinja, proučavanju uzgojnih obraza u populaciji životinja te otkrivanju i dijagnosticiranju određenih bolesti.

Tehnika korištenja RFLP otkrivanja varijacija genoma važan je alat u mapiranju genoma i analizi genetskih bolesti. Ako se lokacija određenog gena bolesti traži u određenom kromosomu, istraživači bi analizirati DNK članova obitelji s tom bolešću, a zatim potražite slične obrasce nasljeđivanja u RFLP-u aleli.

Jednom kada se gen lokalizira, provođenje RFLP analize na drugim članovima obitelji moglo bi otkriti nositelja mutiranih gena ili signalizirati ukupni rizik od bolesti. Važno je napomenuti da se RFLP tehnika naširoko ne koristi sada kada se za analizu DNK u forenzičkoj znanosti i nekoliko drugih područja koriste novije, robusnije tehnike.

Nažalost, tehnika RFLP analize je zamorna i spora. Osim što zahtijeva veliku količinu DNK uzorka - uzorak bi obično trebao biti oko veličine četvrtine, što jest relativno velik za DNK uzorke - proces, od obilježavanja sonde do pranja i autoradiografije, može trajati cijeli mjesec do potpuna.

Rezultati projekta Ljudski genom poprilično su zamijenili potrebu za RFLP-om. Projekt je omogućio određivanje cjelokupne sekvence DNA koja se nalazi u ljudskim stanicama, ljudskom genomu i identificiranje svih gena u ljudskom genomu.