Buferna rješenja su tekućine na bazi vode koje uključuju i slabu kiselinu i njenu konjugiranu bazu. Zbog svoje kemije, puferske otopine mogu održavati pH (kiselost) na gotovo konstantnoj razini čak i kada se događaju kemijske promjene. Sustavi pufera pojavljuju se u prirodi, ali su također izuzetno korisni u kemiji.
Koristi za puferne otopine
U organskim sustavima prirodne puferske otopine održavaju pH na dosljednoj razini, omogućujući tako da se odvijaju biokemijske reakcije bez nanošenja štete organizmu. Kada biolozi proučavaju biološke procese, moraju održavati isti dosljedni pH; za to su koristili pripremljene otopine pufera. Puferne otopine prvi put su opisane 1966. godine; danas se koriste mnogi isti tampon.
Da bi bili korisni, biološki puferi moraju zadovoljiti nekoliko kriterija. Konkretno, trebali bi biti topljivi u vodi, ali nisu topljivi u organskim otapalima. Ne bi trebali prolaziti kroz stanične membrane. Pored toga, moraju biti netoksični, inertni i stabilni u svim eksperimentima za koje se koriste.
Puferne otopine prirodno se javljaju u krvnoj plazmi, zbog čega krv održava dosljedan pH između 7,35 i 7,45. Buferne otopine se također koriste u:
- fermentacijski procesi
- umiruće tkanine
- kemijska analiza
- umjeravanje pH metara
- Ekstrakcija DNK
Što je Tris pufer rješenje?
Tris je kratki za tris (hidroksimetil) aminometan, kemijski spoj koji se često koristi u fiziološkoj otopini, jer je izotoničan i netoksičan. Budući da Tris ima pKa od 8,1 i pH razinu između 7 i 9, otopine Tris pufera se također često koriste u nizu kemijskih analiza i postupaka, uključujući ekstrakciju DNK. Važno je znati da se pH u otopini tris pufera mijenja s temperaturom otopine.
Kako pripremiti Tris Buffer
Lako je pronaći komercijalno dostupno rješenje tris pufera, ali moguće je i sami napraviti odgovarajuću opremu.
materijali:
Izračunajte količinu svake stavke koja vam je potrebna na temelju molarne koncentracije željene otopine i količine pufera koji vam je potreban.
- tris (hidroksimetil) aminometan
- destilirana deionizirana voda
- HCl
Postupak:
- Započnite s određivanjem koncentracije (molaritet) i volumen Tris međuspremnika koji želite napraviti. Na primjer, otopina Tris pufera koja se koristi za fiziološku otopinu varira od 10 do 100 mM. Nakon što odlučite što pravite, izračunajte broj Tris-a, koji su potrebni tako da množite molarnu koncentraciju pufera s volumenom pufera koji se pravi. (moli Tris = mol / L x L)
- Zatim odredite koliko je grama Tris-a množenjem broja mola u molekularnoj masi Tris-a (121,14 g / mol). grama Tris = (mola) x (121,14 g / mol)
- Otopite Tris u destiliranu deioniziranu vodu, 1/3 do 1/2 vašeg željenog konačnog volumena.
- Pomiješajte u HCl (npr., 1M HCl) sve dok pH metar daje vam željeni pH za vašu Tris pufersku otopinu.
- Pufer razrijedite vodom da biste postigli željeni konačni volumen otopine.
Nakon što se otopina pripremi, može se čuvati mjesecima na sterilnom mjestu pri sobnoj temperaturi. Dug rok trajanja otopine Tris pufera je moguć jer otopina ne sadrži proteine.