Natrij-citratni pufer često se koristi za izolaciju RNA, jer minimalizira hidrolizu baznih vlakana RNA, što ga čini neprocjenjivim za pročišćavanje mRNA tijekom genomska istraživanje i za proučavanje transkripcije. Puferi na bazi citrata pomažu i u otkrivanju antigena u pripravcima fiksnog tkiva, jer oni prekidaju umrežene veze nastale između antigena i medija za fiksiranje.
Sljedećim jednostavnim koracima može se stvoriti pufer natrijev citrat s pH 6 (kiseli) za manje od 10 minuta.
Materijali za pufer natrij-citratnog putera
Potrebno je malo materijala za izradu pufera natrijevog citrata. Uz limunsku kiselinu potrebna je samo 1M natrijeva hidroksida, destilirana voda i umjerena pH sonda. Natrijum citrat nije obavezan.
Za izradu pufera potrebni su i litrastični cilindrični cilindar, 1-litarska boca s volumenom i tri boce od 1 litre medija. Napokon, trebat će vam magnetska miješalica i magnetska miješalica. Svi ti materijali mogu se naći u školi, laboratorije na radnom mjestu ili biti kupljeni na mreži ili u trgovinama specijalne robe.
Dvije mogućnosti pravljenja pufera
Postoje dvije metode izrade pufera natrijevog citrata, ovisno o materijalima koji su vam dostupni.
- Ako imate i limunsku kiselinu i konjugatnu bazu, stvorite osnovnu otopinu za svako miješanje 21 grama limunske kiseline u 1 litri destilirane vode i 29,4 grama natrijevog citrata u 1 litri destilirane vode voda.
- Ako imate samo limunsku kiselinu pri ruci, pomiješajte 2,1 grama s nešto manje od 1 litre destilirane vode.
Miješanje otopina limunske kiseline i natrij-citrata
Pomiješajte 82 mililitara otopine limunske kiseline s 18 mililitara otopine natrijevog citrata. U tu svrhu dodajte dovoljno destilirane vode da se volumen smjese stavi malo ispod 1 litre.
Podešavanje pH vrijednosti
Dok lagano miješate otopinu magnetskom miješalicom, upotrijebite 1M natrijevog hidroksida za podešavanje pH smjese na 6,0. Potom, s volumetrijskom tikvicom dodajte još destilirane vode da se konačni ukupni volumen otopine stavi na točno 1 litra.