Fiziološka otopina fosfatna otopina ili PBS otopina

PBS ili fosfat-puferiranu slana je puferska otopina to je posebno vrijedno jer oponaša koncentraciju iona, osmolarnost i pH tekućine u ljudskom tijelu. Drugim riječima, to je izotonično na ljudske otopine, tako da je manje vjerojatno da će u biološkim, medicinskim ili biokemijskim istraživanjima uzrokovati oštećenje stanica, toksičnost ili neželjene oborine.

Postoji nekoliko recepata za pripremu otopine PBS-a. Esencijalna otopina sadrži vodu, natrijev hidrogenfosfat i natrijev klorid. Neki pripravci sadrže kalijev klorid i kalijev dihidrogen fosfat. EDTA se također može dodati u staničnoj pripremi da se spriječi nakupljanje.

Fiziološka otopina fosfata nije idealna za upotrebu u otopinama koje sadrže dvovalentni kationi (Fe²⁺, Zn²⁺) jer se mogu pojaviti oborine. Međutim, neke otopine PBS-a sadrže kalcij ili magnezij. Također, imajte na umu da fosfat može inhibirati enzimske reakcije. Budite posebno svjesni ovog potencijalnog nedostatka pri radu s DNK. Iako je PBS izvrstan za fiziološku znanost, imajte na umu da se fosfat u uzorku puferiranom u PBS može istaložiti ako se uzorak pomiješa s etanolom.

Tipični kemijski sastav 1X PBS ima konačnu koncentraciju od 10 mM PO₄³⁻, 137 mM NaCl, i 2,7 mM KCl. Evo konačne koncentracije reagensa u otopini:

Ovisno o svojoj namjeni, možete pripremiti 1X, 5X ili 10X PBS. Mnogi ljudi jednostavno kupuju PBS tablete, otapaju ih u destiliranoj vodi i podešavaju pH po potrebi s klorovodičnom kiselinom ili natrijev hidroksid. Međutim, lako je napraviti rješenje ispočetka. Evo recepata za 1X i 10X fiziološku otopinu fosfata:

1. Otopite reagens soli u 800 ml destilirane vode.
2. Podesite pH na željenu razinu klorovodičnom kiselinom. Obično je to 7,4 ili 7,2. Pomoću pH metra izmjerite pH, a ne pH papir ili drugu nepreciznu tehniku.
3. Dodajte destiliranu vodu kako biste postigli konačni volumen od 1 litre.

Sterilizacija nije potrebna za neke primjene, ali ako je sterilizirate, otopite otopinu u alikvotima i autoklavite 20 minuta pri 1,05 kg / cm²) ili koristiti filtracijsku sterilizaciju.

Može biti fiziološka otopina fosfata čuvati na sobnoj temperaturi. Također može biti u hladnjaku, ali 5X i 10X rješenje može talog kada se ohladi. Ako morate ohladiti koncentriranu otopinu, prvo je čuvajte na sobnoj temperaturi dok niste sigurni da su se soli potpuno otopile. Ako se pojave oborine, zagrijavanje temperature vratit će ih u otopinu. Rok trajanja rashladne otopine je 1 mjesec.

10X je koncentrirana ili osnovna otopina, koja se može razrijediti tako da se dobije 1X ili normalna otopina. Da bi se postiglo normalno razrjeđivanje, 5X otopina se mora razrijediti 5 puta, dok se 10X otopina mora razrijediti 10 puta.

Da biste pripremili 1 litru radne otopine 1X PBS iz 10X otopine PBS-a, dodajte 100 ml 10X otopine u 900 ml vode. Ovo samo mijenja koncentraciju otopine, a ne gram ili molarnu količinu reagensa. Na pH ne smije utjecati.

Drugo popularno pufersko rješenje je Dulbeccova fosfatna otopina puferirana fosfatom ili DPBS. DPBS se, poput PBS, koristi za biološka istraživanja i pufere u rasponu pH 7,2 do 7,6. Može se čuvati na sobnoj temperaturi. Dulbeccova otopina sadrži nižu koncentraciju fosfata. To je 8,1 mM mM fosfatnih iona, dok je redoviti PBS 10 mM fosfata. Recept za 1x DPBS je:

Otopite soli u 800 ml vode. Podesite pH na 7,2 do 76 pomoću klorovodične kiseline. Podesite konačni volumen na 1000 ml s vodom. Autoklavite na 121 ° C 20 minuta.

• Dulbecco, R.; i sur. (1954). "Formiranje plaka i izolacija čistih linija s poliomielitis virusima". J. Exp. Med. 99 (2): 167–182.
• "Fiziološka otopina punjena fosfatima (PBS." Protokoli hladne proljetne luke (2006). Laboratorijska presa hladnog proljeća.